非变性凝胶蛋白电泳试剂盒（含塑料板预制胶）
Native PAGE Gel Protein Electrophoresis
Kit Ver.860970-1.0
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货号
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名称
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规格
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RTD6135P
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非变性凝胶蛋白电泳试剂盒（含塑料板预制胶）
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10次
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● 产品组成：
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货号
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名称
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规格
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贮存
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RTD6119-0415-11
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4-15%RealPAGE
Tris-Glycine预制胶(塑料板) 11孔
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10板
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4℃
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PL111-01
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5×非变性非还原蛋白上样缓冲液
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1 mL
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-20℃
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TG130P
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5×Tris-甘氨酸电泳缓冲液（粉末型）
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1 L
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RT
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RTD6202-02
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FastBlue蛋白染色液
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500 mL
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RT
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● 贮存、效期及运输：
预制胶于 4 ℃贮存，禁止冷冻；其他组分按标签所示温度贮存。产品有效期为
1 年。常温运输。
● 产品简介：
本公司提供的非变性凝胶蛋白电泳试剂盒包含非变性 PAGE 电泳及染色所需的主要试剂，用户只需自备蛋白电泳设备及待测样品。试剂盒配套有预制胶，不需要自己制备凝胶，方便使用。试剂盒同时提供非变性蛋白上样缓冲液、电泳缓冲液及蛋白染色液，可完成蛋白样品从上样、电泳到染色的全过程。
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技术规格
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塑料胶板尺寸
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10×8.2 cm
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凝胶尺寸及厚度
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凝胶尺寸及厚度：8.2 × 7.2 cm；厚度 1 mm
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加样孔
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11齿
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凝胶浓度
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4-15%梯度胶（Tris-甘氨酸体系）
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推荐上样体积
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推荐上样体积10-20 μL；最大上样体积35 μL
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检测分子量范围
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最佳分离范围：30-800 kDa；可分离范围：20-1000 kDa
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推荐染色方法
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推荐使用FastBlue蛋白染色液（RTD6202）快染
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推荐非变性Marker
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宽分子量非变性电泳蛋白质Marker II（21-880
kD）（RTD6136）
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推荐电泳缓冲液
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Tris-甘氨酸电泳缓冲液（TG130,TG130P,TG170,TG191P）
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推荐上样缓冲液
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5×非变性非还原蛋白上样缓冲液（PL111）
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推荐电泳条件
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推荐恒压 150 V 电泳，电泳时间约 60–80 min
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转膜
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湿转：推荐使用 Tris-甘氨酸转膜缓冲液（TB1040）
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不适用变性电泳
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本预制胶不适用于变性 PAGE 电泳。
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特别说明：本系统采用非连续 Laemmli
Tris-Glycine 电泳体系，凝胶及电泳缓冲体系的工作 pH 约为 8.3–8.8。待分离蛋白的等电点（pI）应低于电泳体系
pH，使蛋白在电泳条件下整体带负电荷，并向正极迁移。通常建议用于
pI ≤ 8.0 的酸性或中性蛋白。对于 pI > 8.0 的碱性蛋白，建议选择适用于碱性蛋白的电泳体系（RTD6131）或BN体系（RTD6139或RTD6140）。
● 使用说明：
1. 样品制备：
本试剂盒不包含样品制备相关试剂，请根据实验目的及相关参考文献制备非变性蛋白样品。
注：制备非变性蛋白样品时，请勿加入 SDS、LDS 等变性剂，以及 DTT、β-ME（BME）、TCEP 等还原剂，以避免蛋白发生变性或蛋白复合物解离。非变性 PAGE 对样品中的盐离子浓度较为敏感，建议将样品中的盐浓度尽量控制在 100 mM 以内。盐浓度过高可能导致电泳电流增大、条带拖尾或分辨率下降。
2. 电泳：
2.1 拆开预制胶包装，撕掉底部胶条，拔掉梳子，梳孔朝下轻甩胶板，去除胶孔中可能有的残胶，将预制胶安装在合适的电泳槽中。
注：使用 Bio-Rad Mini III、Mini-PROTEAN Tetra Cell、天能 VE-180 及六一 24K 系列电泳槽时，请注意密封条的正确安装方向（见图 1–4）。六一其他系列、君意东方 JY-SCZ2/4、百晶
BG-verMINI 等电泳槽可直接使用。本预制胶不兼容 Thermo Fisher Mini Gel
Tank 系列电泳槽。
2.2 准备电泳缓冲液：
将 5× Tris-甘氨酸电泳缓冲液（粉末型，TG130P）溶于 1 L 超纯水中并充分混匀，无需调节 pH。使用前用超纯水稀释 5 倍，配制成 1× Tris-甘氨酸电泳缓冲液。
2.3准备上样样品：
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总体积
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10
μL
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蛋白样品
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x μL
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5×非变性非还原蛋白上样缓冲液
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2 μL
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超纯水
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补至10 μL
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样品无需加热
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2.4电泳过程；
在电泳槽内槽中加入 1× Tris-甘氨酸电泳缓冲液，使缓冲液液面完全覆盖加样孔。使用 1 mL 移液器吸头轻轻冲洗加样孔 1–2 次，以去除孔内残留物；随后向外槽加入适量 1× Tris-甘氨酸电泳缓冲液。完成上样后开始电泳。
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恒电压
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起始电流
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结束电流
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电泳时间
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150 V
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40-30 mA/板胶
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10-15 mA/板胶
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60-80 min
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注：恒压模式下，电流由电泳体系自动决定，并通常随电泳进行逐渐下降。建议记录起始电流和结束电流，以便监控电泳状态。建议按照推荐电压运行。提高电压会增加凝胶及电泳缓冲液的焦耳热，可能导致蛋白条带弯曲、扩散或分辨率下降。电泳过程中如缓冲液温度明显升高，可适当降低电压或采取冷却措施。
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2.5 拆胶：
使用配套工具撬动胶板（参见示意图），小心剥下凝胶。
3. 染色：
3.1 将电泳后的 PAGE 胶取出，置于合适的塑料容器中，加入适量 FastBlue 蛋白染色液，以刚好没过胶面为宜。常温摇床轻摇，对于蛋白量 ≥1
μg 的条带，通常
5–10 min 即可观察到明显显色。
3.2 常温摇床继续摇动15-30分钟至条带清晰可见。
3.3 加入适量蒸馏水脱色，期间更换1-2次蒸馏水，常温摇床摇动10-15分钟至背景干净。
3.4 观察、拍照并保存实验结果。
4. 实验示例:
RTD6117-0415 4-15% RealPAGE Precast Gel
150V 35-11mA 67min
1×Tris-甘氨酸电泳缓冲液
FastBlue蛋白快速染色染色15分钟
引用RTD6135 非变性凝胶蛋白电泳试剂盒（含预制胶RTD6117-0415）发表文章
1. [2025 IF=8.1] The
OsFBX388-OsFIP1-OsCatA module regulates ROS homeostasis and disease resistance
in rice.
Product: RTD6135
非变性凝胶蛋白电泳试剂盒（含预制胶）
Author: Tiancheng Qiu,
Yixin Li, Qingyuan Bai, Yapu Cheng, Kexing Fang, Yayan Feng, Mengni Yang, Vijai
Bhadauria, You-Liang Peng，Wensheng Zhao
Journal: New
Phytologist (2025) Accepted: 23 June 2025
Institution：China Agricultural University
Paper link：doi: 10.1111/nph.70383
2. [2025 IF=3.6] Structural
and Functional Dissection of the Dimerization-Dependent Secretion Mechanism of
BsPdhD in Bacillus subtilis.
Product: RTD6135
非变性凝胶蛋白电泳试剂盒（含预制胶）
Author: Bin Xue, Bei-Feng-Chu Zheng, Hui-Qi Mao, Lu-Ying Gu,
Xin-Ru Bian, Yuan Yuan, Muhammad Shafiq, Wen-Ting Dai, Ya-Jun Wang
Journal: Biotechnology
and Bioengineering, 2025; 1–15
Institution：College of Pharmaceutical Sciences, Zhejiang
University of Technology
Paper link： https://doi.org/10.1002/bit.70084
