RealPAGE®类梯度PAGE凝胶快速电泳试剂盒
RealPAGE® Gradient-like
PAGE Gel Rapid Electrophoresis Kit
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货 号
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名 称
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可制胶数量
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RTD6165
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RealPAGE®类梯度PAGE凝胶快速电泳试剂盒
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60块 0.75 mm胶
＞45块1.0 mm胶
＞30块1.5 mm胶
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● 货品内容：
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组份
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名称
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规格
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1
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上层胶溶液（2×）
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40 ml
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2
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红色上层胶缓冲液（2×）
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40 ml
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3
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下层胶溶液（2×）
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125 ml
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4
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下层胶缓冲液（2×）
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125 ml
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5
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改良型促凝剂
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10 ml
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6
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刻度配胶杯
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6个
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6
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快速电泳缓冲液（20×）
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2×500
ml
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7
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说明书
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一份
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● 运输、贮存及效期：
本产品常温运输；4-8℃贮存，其中配制后的改良型促凝剂贮存于-20℃；有效期一年。
● 产品特点：
分离范围广：所配制凝胶具有类似梯度胶分离能力，无需区分不同浓度下层胶；
电泳速度快：200-250 V 恒压，25-35 min 即可完成电泳；
快速制备凝胶：无需液封等待下层胶凝固，即可直接灌注上层胶，制胶更省时；
红色上层胶：可制备带颜色的上层胶，为点样和区分不同凝胶提供便利；
避免异味：无需使用 TEMED，环境安全友好；
● 产品简介：
该产品利用聚丙烯酰胺凝胶电泳原理，采用独特配方，所配制的凝胶具有类似梯度胶分离能力（10~250 kDa），低、中、高分子量蛋白可均匀分布，无需区分不同浓度下层胶；试剂盒采用上层胶和下层胶的预混配方，只需加入改良型促凝剂即可凝胶，灌入下层胶后，无需等待凝胶，直接灌入上层胶即可，简便快捷；所配的上层胶为红色，点样孔清晰易辨，方便点样。
本产品专门用于 SDS-PAGE电泳（不适用于非变性电泳），包含全套 PAGE 凝胶制备试剂和配套电泳缓冲液，并且在 200-250 V 恒压条件下，25-35 min 即可完成电泳。
本产品配套提供改良型促凝剂 ，其具有更好的稳定性和催化效能，配胶过程中无需额外添加TEMED。
本试剂盒大约可以配制30-60块常规大小（8×10 cm）的PAGE凝胶，具体数量根据凝胶厚度决定：0.75 mm厚度凝胶可以配制60块胶，1.0 mm厚度凝胶可以配制至少45块胶，1.5 mm厚度凝胶可以配制至少30块胶。
● 使用说明：
一. 制胶前的准备：
1.1 即用型改良型促凝剂配制：
试剂盒提供的改良型促凝剂为干粉，第一次使用前加入10 ml超纯水，彻底溶解后使用。配制好的即用型改良型促凝剂置于4℃备用，长期不用建议-20℃贮存。
1.2
推荐操作：
实验前半小时，取出试剂盒所有组份，常温静置半小时使溶液恢复到常温后轻柔混匀后使用，可以有效降低制胶时产生气泡的可能性。
二. 凝胶配制(以一块0.75/1.0/1.5 mm厚度的8×10cm胶为例)：
2.1取等体积红色上层胶缓冲液和上层胶溶液，各0.5/0.75/1.0 ml，混匀；
注：由于染料的特殊理化性质，红色上层胶缓冲液使用前请摇匀。
2.2取等体积下层胶缓冲液和下层胶溶液，各2.0/2.5/4.0 ml，混匀；
2.3
向步骤2.1的上层胶混合溶液中加入10/15/20
μl改良型促凝剂，轻轻混匀。
注：加入改良型促凝剂后，需轻柔混匀，防止过多氧气混入胶溶液，抑制凝胶聚合和导致凝胶内可能产生气泡。
2.4
向步骤2.2的下层胶混合溶液中加入40/50/80
μl改良型促凝剂，轻轻混匀；将溶液注入制胶玻璃板中，使液面和短玻璃板上沿之间的距离为约1.5
cm或距离梳齿下沿距离为约0.5
cm即可；
注：此溶液为过量，请勿全部注入，可留少许于制胶杯中，便于判断凝胶状态；加入改良型促凝剂后，需轻柔混匀，防止过多氧气混入胶溶液，抑制凝胶聚合和导致凝胶内可能产生气泡。
2.5 无需等待下层胶凝固，迅速将步骤2.3的上层胶混合溶液左右平移缓慢轻柔注入制胶玻璃板中，插入梳齿。
注：加入下层胶混合液后，请在1-2分钟内灌注上层胶混合溶液，加入时一定要轻缓，避免将上层胶溶液冲入下层胶；凝固后上下层胶分界线平整度略弱于使用封闭方法配制的凝胶，但对后续电泳没有影响。
2.6 待胶凝固后拔去梳齿，用注射器或枪头吸取电泳缓冲液将加样孔冲洗干净，即可进行常规电泳操作。
注：凝胶的聚合时间与环境温度有关。夏天温度较高时，聚合较快；冬天气温低时，聚合时间会延长。
温度与凝胶时间参考表
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环境温度
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18℃
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25℃
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37℃
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凝固时间
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~20 min
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~15 min
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~10 min
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附：凝胶配方表
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表一 红色上层胶配方
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表二 下层胶配方
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胶厚度
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红色上层胶缓冲液
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上层胶溶液
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促凝剂
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胶厚度
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下层胶缓冲液
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下层胶溶液
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促凝剂
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0.75 mm
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0.5 ml
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0.5 ml
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10 μl
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0.75 mm
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2.0 ml
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2.0 ml
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40 μl
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1.0 mm
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0.75 ml
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0.75 ml
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15 μl
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1.0 mm
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2.5 ml
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2.5 ml
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50 μl
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1.5 mm
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1.0 ml
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1.0 ml
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20 μl
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1.5 mm
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4.0 ml
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4.0 ml
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80 μl
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三. 电泳：
3.1 1×即用型快速电泳缓冲液配制：
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500 ml配制量
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快速电泳缓冲液（20×）
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25 ml
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超纯水
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定容至500 ml
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3.1.2
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电泳缓冲液
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1×即用型快速电泳缓冲液
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上样缓冲液
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5×蛋白上样缓冲液（变性，还原）
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电泳条件
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恒压 200 V ~35 min
恒压 250 V ~25 min
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注：本产品所配制凝胶需搭配快速电泳缓冲液使用，才能得到类梯度分离蛋白的效果；如果使用经典的Laemmli电泳缓冲液（Tris-甘氨酸-SDS电泳缓冲液），分离效果类似于8% 凝胶。
四. 凝胶染色或转膜：
4.1 凝胶染色可以选择FastBlue蛋白快速染色液(货号：RTD6202)， 可以在30分钟内完成染色和脱色，也可以选择常规法考马斯亮蓝蛋白染色液（货号：RTD6203）。
4.2 转膜缓冲液可以使用湿转法或半干转方法转膜。湿转法可以使用经典Tris-甘氨酸转膜缓冲液（货号：TB1040）或者使用10×RealBlot快速转膜液（货号：RT5020）。半干转转膜可以使用5×RealBlot快速半干转转膜缓冲液（货号：RT5030）。