Enzyme Premix酶混合物
注：该产品为RTU4082 植物原生质体制备试剂盒中酶组份
一、原生质体分离：
即用型酶溶液配制
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5 ml配制量
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溶液I（2×）
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2.5 ml
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酶混合物
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0.095克
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55℃处理10分钟，间歇混匀，冷却到常温后加入以下试剂
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还原剂
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2.5 μl
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50mg/ml BSA
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0.1 ml
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灭菌水
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定容至5 ml
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注：溶液I容易被微生物污染，使用时须严格按照无菌操作规范进行或者适当分装后使用。
55℃处理能灭活核酸酶和蛋白酶并促进酶的溶解；
即用型酶溶液现用现配，不建议配制后冻存后再使用；
溶解好的正常酶溶液应为澄清棕黄色溶液，如使用纯度不好的酶，溶液为不溶解的乳白色悬浊液，不能使用。
1. 酶解：
取生长状态良好的叶片切成0.5-1 mm的小条，按照0.1 克叶片（拟南芥约15-20个叶片）加5 ml即用型酶溶液的比例迅速将切割好的叶片小条浸泡于酶溶液中，避光，无需震荡，常温（20-25℃）酶解3小时，间歇混匀。
注：酶解时间与叶片种类，叶片生长状态有关，请根据实验需要适当调整酶解时间。3小时为拟南芥叶片推荐的酶解时间。如条件允许，可以使用微型真空泵常温避光条件下抽真空30 min，以使酶溶液更好地进入细胞间隙。酶溶液变为绿色表明有原生质体已经有分离，溶液为浓绿色表明原生质体已经大量分离。拟南芥原生质体大小约为30-50 μm，显微镜镜检后确定是否分离。叶片原生质体细胞显微镜下为绿色圆球状，叶绿体分散在整个细胞内，说明状态较好；如呈现不规则形状，说明原生质
体破碎或即将破碎。